按ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求準備實(shí)驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。

　　洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應步驟，但卻也決定著(zhù)實(shí)驗的成敗。ELISA測試盒就是靠洗滌來(lái)達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結合的物質(zhì)，以及在反應過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時(shí)又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)?？梢哉f(shuō)在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。

　　洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過(guò)程如下：

 

　　1.浸泡式

　　a.吸干或甩干孔內反應液;b.用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿(mǎn)板孔后，即甩去);c.浸泡，即將洗滌液注滿(mǎn)板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不可隨意縮短;d.吸干孔內液體。吸干應*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;e.重復操作c和d，洗滌3-4次(或按說(shuō)明規定)。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數或延長(cháng)浸泡時(shí)間。

　　微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結合，并借助于親水基團和水分子的結合作用，使蛋白質(zhì)回復到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時(shí)，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。

 

　　2.流水沖洗式

　　流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來(lái)水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗，持續沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為*，且也簡(jiǎn)便、快速。已有實(shí)驗表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。