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Elisa試劑盒專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)商介紹Elisa試劑盒洗滌方法

發(fā)布時(shí)間:2017/5/23      點(diǎn)擊次數:1379
     本文由Elisa試劑盒專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)商來(lái)介紹下Elisa試劑盒的洗滌方法。
    按ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求準備實(shí)驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。
  洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應步驟,但卻也決定著(zhù)實(shí)驗的成敗。ELISA測試盒就是靠洗滌來(lái)達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結合的物質(zhì),以及在反應過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時(shí)又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)??梢哉f(shuō)在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。
  洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過(guò)程如下:
 
  1.浸泡式
  a.吸干或甩干孔內反應液;b.用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿(mǎn)板孔后,即甩去);c.浸泡,即將洗滌液注滿(mǎn)板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動(dòng),浸泡時(shí)間不可隨意縮短;d.吸干孔內液體。吸干應*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;e.重復操作c和d,洗滌3-4次(或按說(shuō)明規定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數或延長(cháng)浸泡時(shí)間。
  微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質(zhì)回復到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時(shí),可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
 
  2.流水沖洗式
  流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來(lái)水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗,持續沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡(jiǎn)便、快速。已有實(shí)驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。

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